＜蒸留操作＞

• （1）試料50 mLを蒸留フラスコ500 mLに取り、水を加えて約250 mLとします。指示薬としてフェノールフタレイン溶液（5 g/L）を1滴加えます。指示薬は試料のpHを確認するために使用します。
• （2）試料がアルカリ性の場合には、溶液の赤い色が消えるまでりん酸を滴下し、溶液を弱酸性にします。試料のpHがアルカリ性の場合、操作(4)でリン酸10 mL添加してもpHが2以下にならない可能性があるからです。
• （3）アミド硫酸アンモニウム溶液（100 g/L）を1 mL加えます。試料に亜硝酸イオンが存在すると加熱蒸留時にEDTAと反応してシアン化水素を生成しますので、アミド硫酸アンモニウム溶液を添加して亜硝酸イオンを除去します。
• （4）蒸留フラスコを図のように接続し、受器にはメスシリンダー（有栓形）100 mLを用い、吸収液として（20 g/L）水酸化ナトリウム溶液を20 mL加え、蒸留装置に接続します。逆流止めの先が水酸化ナトリウム溶液に浸かるようにします。
• （5）注入漏斗から蒸留フラスコにりん酸10 mLを加え、次に、EDTA・4Na溶液10 mLを加え、少量の水で注入漏斗を洗い、洗液を蒸留フラスコに加えます。金属シアノ錯体からシアン化物イオンを解離します。
• （6）数分間静置した後、蒸留フラスコを加熱し、留出速度2~3 mL/minで受器の液量が約90 mLになるまで蒸留します。
• （7）受器および逆流止めを取り外し、冷却器の内管および逆流止めの内管を少量の水で洗い、洗液も受器に加えた後、水を100 mLの標線まで加えます。
• （8）空試験として、水50 mLについて（1）～（7）まで行います。

＜薬品＞

• 酢酸（1+8）（1 g/L）
• フェノールフタレイン溶液（5 g/L）
• りん酸塩緩衝液（pH7.2）
• クロラミンT溶液（10 g/L）
• 4-ピリジンカルボン酸-ピラゾロン溶液

＜装置＞

• 恒温槽（25 ℃ウォーターバス）
• 分光光度計

＜手順＞

• （1）前処理で得られた留出液から10 mLを全量フラスコ50 mLにとります。
• （2）指示薬としてフェノールフタレイン溶液を1滴加え、静かに振り混ぜながら溶液の赤い色が消えるまで酢酸（1+8）を滴加した後、りん酸緩衝液（pH7.2）を10 mL加え、pHを7～8にします。pH7～8は発色の最適pHです。
• （3）クロラミンT（10 g/L）溶液を0.5 mL加え、約25 ℃の水浴中で５分間静置します。クロラミンTを添加して塩化シアンを生成させます。
• （4）4-ピリジンカルボン酸-ピラゾロン溶液を10 mL加え、さらに水を標線まで加え、密栓して静かに振り混ぜ後、25 ℃の水浴中で30分間静置して発色させます。水温は25℃より低いと発色の速度が遅くなり、25℃より高いと発色速度は速くなりますが、安定性が弱くなります。
• （5）発色後30分以内に溶液の一部を吸収セルに移し、波長638 nm付近の吸光度を測定します。吸光度を測定する前までは25℃の水浴中で静置させます。
• （6）空試験として蒸留操作（8）で得られた留出液を用いて（1）～（5）まで行います。

＜検量線＞

• （1）シアン化物イオン標準液（CN^- 1 µg/mL）0.5～9 mLをそれぞれ全量フラスコ50 mLにとり、水を加えて約10 mLとした後、手順（2）～（5）を行います。
• （2）検量線用空試験として水を用いて手順（2）～（5）を行い、標準液で得られた吸光度の値を補正します。
• （3）シアン化物イオンの量と吸光度の関係を表すグラフを作成します。